Beszámoló

Milyen sorrendben érdemes haladni az eszközök megismerésével?

I. Gélelektroforézis

Több gyakorlatban is használjuk az eljárást:

1. Ételfestékek (pl. cukormázból kioldottak) kromatográfiás elválasztása (Biorad20) - ezzel érdemes kezdeni
2. Lambda fág hasítása restrikciós enzimekkel, DNS termékek elektroforézise (Biorad16)
3. DNS nyomozás: 5 gyanúsított + 1 elkövető DNS mintáját restrikciós enzimekkel hasítjuk (45 percig 37C-on inkubálva zajlik az emésztés), a keletkező DNS darabokat elektroforézissel elválasztjuk (Biorad3)

II. PCR

1. Validáló készlet a PCR működésének bemutatásához, kipróbálásához - doksi Érdemes kipróbálni, mielőtt felhasználunk egy KIT-et: ezzel gyakorolhatjuk a minták bemérését, a PCR beállítását, látjuk hogyan működik
2. DNS nyomozás PCR-al: 4 gyanúsított + 1 elkövető DNS mintáját vizsgáljuk, 11-es kromoszómán a tirozin-hidroxiláz enzimet kódoló gén intronjában levő TH01 lókuszt fogjuk PCR-al felszaporítani, a DNS termékeket eletroforézissel szétválasztjuk (Biorad4)
3. Human PV92: diákok megismerjék és elsajátítsák a humán mintából való DNS kinyerés legegyszerűbb lépéseit, majd a kinyert örökítőanyag egy szakaszát felszaporítják polimeráz láncreakció (PCR) segítségével. Ezt követően a keletkező PCR termékek gélelektroforézise és DNS festése után összehasonlítják a saját DNS-ből származó minta fragmentmintázatát három kontroll mintával, meghatározzák a saját 16. kromoszóma PV92 lókuszának a genotípusát (Alu szekvencia megléte vagy hiánya). Végül összegyűjtik és kiértékelik a csoportok eredményeit, az allélgyakoriságokat összehasonlítják más országokból származó adatokkal (Biorad2)

III. Spektrofotométer

1. Tejminták fehérjetartartalmát határozhatjuk meg Bradford reagenssel (spektrofotométer nélkül is becsülhető a szín alapján a fehérje mennyisége) (Biorad13)

IV. Baktérium transzformáció:

1. E. coli (plazmidmentes!) baktériumokba pGLO plazmiddal zölden fluoreszkáló fehérje génjét építjük be. A génkifejeződés arabinózzal indukálható, a sikeres génbevitel UV fényben fluoreszkáló baktériumtelepeket eredményez. A plazmid bevitelét hősokkal fogjuk segíteni. FONTOS! A transzformált baktériumok szakszerű megsemmisítéséről gondoskodnunk kell: a kísérletet akkor végezzük el, ha már szerződtünk Zsákos Frodóval, aki elviszi a Végzet Hegyére a transzformált baktériumjainkat megsemmisítés céljából. (Biorad1)

Lambda fág hasítása

Restrikció: ANIMÁCIÓ

CSI - DNS nyomozás + PCR

1. Mit fogunk csinálni? Eszközök és anyagok VIDEÓ
2. CSI nyomozás -
   • Miért kell a PCR? VIDEÓ
   • Hogyan történik? ANIMÁCIÓ
   • PCR szimuláció1: KIPRÓBÁLOM
   • PCR szimuláció2.: KIPRÓBÁLOM
   • COVID teszt i PCR alapú, ZÁLLATORVOS szépen el is magyarázza a PCR-t (7-13. perc)
3. Tanulói feladatok a PCR előkészítéséhez: VIDEÓ
4. PCR készülék indítása: VIDEÓ
5. Gélelfó: ANIMÁCIÓ

Baktérium transzformáció

Hogyan jut át a DNS sejthártyán: SZIMULÁCIÓ

Hogyan transzformálódik? SZIMULÁCIÓ 

PV92 

Alu - Hogyan működik? SZIMULÁCIÓ

Hardy-Weinberg szimuláció

Szimulációk forrása: ITT